树鼩粪便中沙门氏菌LAMP检测方法建立及应用

目的： 建立树鼩粪便沙门氏菌的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,并对此方法进行初步应用。

方法： 根据沙门氏菌种属特异性基因invA(侵袭蛋白基因A)的保守序列,设计合成特异性LAMP 引物。分别设定十个反应温度即57℃ ~66℃和十个反应时间即24 ~42 min 进行优化,并测定本方法的特异性和灵敏度;同时进行普通PCR 实验,作为本方法的验证和比较?用建立的LAMP 法对91 份野生来源的树鼩稀便样品进行检测。

结果： 优化反应条件选出反应温度为62℃,反应时间34 min;该方法对沙门氏菌的灵敏度可达3.36 ×101 CFU/ mL,比普通PCR 方法高10 ~100 倍;对10 种树鼩来源的肠道细菌进行LAMP 检测,只有沙门氏菌属的肠炎沙门氏菌和乙型副伤寒沙门氏菌检测为阳性,其余为阴性;对91 份野生树鼩粪便样品进行LAMP检测,阳性检出率为20.88%;LAMP 法的所有反应可在40 min 内完成?结果 可通过肉眼观察颜色变化直接判定。

结论： 所建立的LAMP 方法具有便捷、快速、灵敏、特异等特点,可用于树鼩粪便中沙门氏菌的大规模快速检测。

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